光是一種電磁波具有一定的波長和頻率?？梢姽獾牟ㄩL范圍在400-760nm，紫外光為200-400mm，紅外光為70-50000m可見光因波長不同呈現不同顏色，這些波長在-定范圍內呈現不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發出的白光是復合光，是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等，這就是光譜。
有色物質溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能里而呈現不同顏色，而某些無色物質能特征性地選擇紫外光或紅外光的能童。物質吸收由光源發出的某些波長的光可形成吸收光譜，由于物質的分子結構不同，對光的吸收能力不同，因此每種物質都有特定的吸收光譜，而且在-定條件下其吸收程度與該物質的濃度成正比，分光光度法就是利用物質的這種吸收特征對不同物質進行定性或定里分析的方法。
分光光度計就是利用分光光度法,通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。不同種類的分光光度計的基本原理相似，都是利用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源。光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，通過測量樣品的吸光值，經過計算可以轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計在追求準確、快速、可靠的同時，小型化、智能化、 網絡化成為了現代分光光度計新的特點和發展點。比如以下對比可以看出：新增加自動波長設定，波長精度:±1nm大幅度提高，彩色觸摸屏應用，功能增加（濃度曲線顯示、多波長設定）配USB接口等。
常規技術參數：
波長范圍:200-1000nm
波長誤差:±1nm
波長重復性:≤0.5nm
光譜帶寬:2nm
雜散光:0.1%(T)（在220nm處，以NaI測定）（在360nm處，以NaNO2測定）
透射比范圍：0.0%-200.0%（T）
透射比準確度：±0.5%（T）
透射比重復性≤0.2%(T)
噪聲：100%(T)≤0.2%(T)，0%(T)≤0.1%(T)
漂移≤0.002(A)/0.5h（開機2h后，250nm和500nm處）
基線平直度：±0.003(A)(210-990nm)
簡易的操作界面
經典分光光度計使用步驟/方法
1)預熱儀器。為使測定穩定，將電源開關打開，使儀器預熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。
2)選定波長。根據實驗要求，轉動波長調節器，使指針指示所需要的單色光波長。
3)固定靈敏度檔。根據有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
4)調節“0”點。輕輕旋動調“0”電位器，使讀數表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。
5)調節T=100%。將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的第一格內，有色溶液放在其它格內，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉動光量調節器，使透光度T=100%，即表頭指針恰好指在T=100%處。
6)測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進入光路，此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A。讀數后，打開比色皿暗箱蓋。
7)關機。實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
注意事項
1)為了防止光電管疲勞。不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長光電管使用壽命。
2)比色皿的使用方法：
①拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
②清洗比色皿時，一般先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。如比色皿被有機物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1∶2)浸泡片刻，再用水沖洗。不能用堿溶液或氧化性強的洗滌液洗比色皿，以免損壞。也不能用毛刷清洗比色皿，以免損傷它的透光面。每次做完實驗時，應立即洗凈比色皿。
③比色皿外壁的水用擦鏡紙或細軟的吸水紙吸干，以保護透光面。
④測定有色溶液吸光度時，一定要用有色溶液洗比色皿內壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。另外，在測定一系列溶液的吸光度時，通常都按由稀到濃的順序測定，以減小測量誤差。
⑤在實際分析工作中，通常根據溶液濃度的不同，選用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.7。
被測溶液很少或者很珍貴情況下
微量比色皿是一種由鋁和石英玻璃制成的高質量比色皿。 它是對微量高濃度樣品進行測量的完美工具。 超微量比色皿其光程長度為1mm，僅為普通比色皿光程長度的十分之一。 這種比色皿特別適用于高濃度核酸和蛋白質樣品的檢測，無需稀釋樣品即可得到高度可重復性結果。由于石英玻璃上的疏水性涂層，只需 1.5 µL 核酸或 3 µL 蛋白樣品即可形成液柱。微量比色皿的背景吸光度很低，可保證較寬的樣品檢測范圍。此外只需5µL 樣品溶液即可進行特定熒光檢測，可節省試劑。
一般情況下，樣品濃度越低，光程長度應越長。朗伯比爾定律表明，如果樣品的濃度非常高，所用的光程長度應該縮短，以確保足夠的光能透過樣品到達檢測器。對于濃度高于25ng/µL的dsDNA 樣品，建議使用等于或短于1 mm 的光程長度進行微量檢測。
利用比色皿進行濃度測定時，通過樣品特定的消光系數和光程長度進行計算是最為常用的方法。 對于常規比色皿，光程長度取決于比色皿的寬度，因為光是水平透過比色皿的。 當使用 超微量比色皿時，上下兩部分的距離決定了光程長度。 因此，濃度的檢測和換算和常規比色皿相同。
部分相關應用
1.核酸定量檢測
2.蛋白質直接定量檢測 (UV 280nm)
3.通過微量比色皿對高濃度樣品進行微量檢測
4.細菌生長測定 (OD600)
5.通過比色法進行蛋白質定量測定，例如 BCA、Bradford、Lowry 法
6.340 nm： NADPH 或 NADH 測定
7.405 nm： 對硝基苯酚測定
8.490 nm： 細胞毒性測定
9.透光度測定
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